醫(yī)學(xué)論文：1,25-(OH)2D3干預(yù)下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表達(dá)

1,25-(OH)2D3干預(yù)下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表達(dá)

[摘要] 目的 通過(guò)建立哮喘小鼠氣道重塑模型，觀察 1,25-(OH)2D3干預(yù)下，哮喘小鼠氣道結(jié)構(gòu)及T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-4（TIM-4）的改變，探討1,25-(OH)2D3與哮喘氣道重塑的關(guān)系。方法 BALB/c系雌性小鼠30只，隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組、1,25-(OH)2D3干預(yù)組，卵清蛋白致敏、激發(fā)建立哮喘模型。取小鼠肺組織，應(yīng)用HE染色及免疫組化技術(shù)觀察氣道重塑情況及TIM-4蛋白表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TIM-4 mRNA的表達(dá)。結(jié)果 哮喘組發(fā)生典型的氣道重塑改變，TIM-4表達(dá)水平升高（0.650±0.023）；1,25-(OH)2D3干預(yù)組較哮喘組氣道重塑有所改善，TIM-4表達(dá)降低（0.435±0.020） ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 TIM-4可能參與小鼠氣道重塑過(guò)程，新型免疫調(diào)節(jié)劑1,25-(OH)2D3可下調(diào)TIM-4的表達(dá)，改善氣道重塑的發(fā)生。
[關(guān)鍵詞] 哮喘；氣道重塑；1,25-(OH)2D3 ；TIM-4；小鼠

1，25-(OH)2D3 down-regulates TIM-4 e*pression in asth
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ory tract remodeling were found in asthmatic group ,with which the TIM-4 increased（0.650±0.023）, asthmatic 1,25-(OH)2D3 group were comparatively decreased （0.435±0.020），the difference has statistically significance. Conclusions TIM-4 presumably related to the mouse respiratory tract remodeling, 1,25-(OH)2D3 is a new type of immune-regulator ,which down-regulated e*pression of TIM-4 to improve respiratory tract remodeling.
Key words : asthma; respiratory tract remodeling; 1,25-(OH)2D3; TIM-4; mice
支氣管哮喘是兒童時(shí)期呼吸系統(tǒng)最常見的疾病之一，以氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性、氣道重塑為基本病理特征，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全清楚。1,25-(OH)2D3是維生素D3的活性代謝產(chǎn)物，研究證實(shí)，除影響骨鈣代謝調(diào)節(jié)外，還具有免疫調(diào)節(jié)作用，主要通過(guò)活化樹突狀細(xì)胞及單核細(xì)胞來(lái)影響免疫狀態(tài)，其作用途徑尚未完全清楚[1-2]。T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白（T cell immunoglobulin mucin protein,TIM）基因家族是新近發(fā)現(xiàn)的基因家族，有研究證實(shí)，TIM蛋白家族對(duì)Th1/Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)應(yīng)答中，有雙向調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化的作用，TIM-4主要表達(dá)在活化的樹突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面，在腫瘤免疫耐受、腎臟缺血再
灌注損傷等方面起到重要作用，和其他免疫性疾病也存在相關(guān)性[4-8]，但對(duì)其如何具體實(shí)現(xiàn)生物學(xué)效應(yīng)尚不完全清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立哮喘小鼠氣道重塑模型及1,25-(OH)2D3干預(yù)，觀察哮喘小鼠氣道重塑情況及TIM-4表達(dá)改變，進(jìn)一步探討哮喘發(fā)病機(jī)制，旨在發(fā)現(xiàn)哮喘治療的新靶點(diǎn)。

1 材料和方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
清潔級(jí)BALB / c小鼠30只,雌性, 6～8周齡,體重(20±2) g,購(gòu)于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SC*K (鄂)2010-0007。雞卵清蛋白( ovalbumin,OVA) ,購(gòu)于Sigma 公司。1,25-(OH)2D3購(gòu)于Sigma公司。Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR 試劑購(gòu)于北京全式金生物技術(shù)有限公司。免疫組化一抗購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；二抗及顯色劑購(gòu)于北京中山生物技術(shù)有限公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 動(dòng)物分組和哮喘小鼠模型的制備 按隨機(jī)化原則將30只小鼠分為哮喘組、1,25-(OH)2D3干預(yù)組、生理鹽水對(duì)照組，每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，參照文獻(xiàn)[3、4]加以改進(jìn),制備動(dòng)物模型。哮喘組、1,25-(OH)2D3干預(yù)組小鼠分別在第1、8、15天腹腔內(nèi)注射抗原混合液0. 2 mL(含OVA 50μg、10%氫氧化鋁0.15ml和生理鹽水0.05ml)致敏,第22天開始霧化吸入1% OVA激發(fā)，每日1次,每次30 min,持續(xù)至第35天,共計(jì)14次。1,25-(OH)2D3干預(yù)組每次激發(fā)前0.5h給予腹腔內(nèi)注射1,25-(OH)2D3 混合液0.1ml（含1,25-(OH)2D3 0.1ug、無(wú)水乙醇2.5ul、生理鹽水0.1ml）[5]，哮喘組以生理鹽水代替。對(duì)照組小鼠的腹腔內(nèi)注射、霧化吸入及霧化吸入前腹腔注射均用生理鹽水代替,次數(shù)同前。
1.2.2 肺組織標(biāo)本制備 各組小鼠于末次霧化結(jié)束后24h內(nèi)以乙醚吸入麻醉，開胸，結(jié)扎左肺門，取出左肺，放于液氮中凍存，留做RT-PCR標(biāo)本；經(jīng)右心室插管至肺動(dòng)脈，用生理鹽水快速?zèng)_洗至無(wú)血液流出，肺葉顏色呈白色后，換4%甲醛溶液沖洗，進(jìn)行內(nèi)固定，取出右肺中葉，置于4%甲醛溶液中進(jìn)行外固定48h，酒精梯度脫水，石蠟包埋，3um厚度切片，分別留做HE染色及免疫組織化學(xué)染色標(biāo)本。
1.2.3 HE及免疫組化染色觀察 石蠟切片脫蠟后，使用蘇木精-伊紅進(jìn)行染色，觀察支氣管壁的形態(tài)學(xué)改變，測(cè)定相同 ……（未完，全文共8800字，當(dāng)前僅顯示2403字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《醫(yī)學(xué)論文：1,25-(OH)2D3干預(yù)下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表達(dá)》）