論文開題報告：基于RAPD的三角梅屬種質資源遺傳多樣性研究

大學本科畢業(yè)論文(設計)開題報告
學院：　化工學院　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：　08園藝（觀賞園藝）　　　　

課題名稱 基于RAPD的三角梅屬種質資源遺傳多樣性研究

1、本課題的的研究目的和意義：
三角梅屬（Bougainvillea）隸屬于紫茉莉科(Nyctaginaceae)，最早由法國大探險家Louis-antoine de Bougainville于1766-1769年在南美洲的巴西發(fā)現(xiàn)并以他的名字命名。該屬僅有3個種具有觀賞價值，但因其花色多樣，在園林中廣泛應用。全世界約有300個三角梅品種，我國保存的品種僅有80多個，且具有極高觀賞價值的雜交三角梅品種較少。
RAPD作為一種分子標記，其操作簡便、快速、費用少，在觀賞植物上己被用于遺傳多樣性方面的研究。通過文獻研究，發(fā)現(xiàn)過去和現(xiàn)在對三角梅的研究主要集中在栽培技術、組織培養(yǎng)等方面，分子生物學方面的研究幾乎為空白，居群的遺傳關系也不明了。對三角梅遺傳演化、種質資源評價、遺傳多樣性等方面研究也較少。
本實驗通過對
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廣泛的應用。而且也是“核心種質”篩選的一個重要工具。
RAPD技術作為一種分子標記具有其獨特的優(yōu)點，其操作簡便、快速、費用少、安全性好，對模板DNA的需求量少、質量要求低。分子標記的發(fā)展使得在DNA水平上進行遺傳變異的研究成為可能，并廣泛應用于遺傳多樣性和親緣關系分析、品種分類與鑒定研究、發(fā)現(xiàn)和檢測突變體及指紋圖譜和遺傳圖譜的構建。
國外對于三角梅的研究文章較少，在分子水平上的可查閱的有Richa Srivastava發(fā)表的一篇三角梅RAPD研究的文章。在國內(nèi)的研究中，王芬芬根據(jù)廈門植物園收集保存的近30個品種，可分為三類，分別為三角梅 (Bougainvilleaspeetabilis)、光葉三角梅(Bougainvilleaglabra)和雜交三角梅 (Bougainvilleabuttiana)。而洪項目認為我國自 1872年引種栽培，現(xiàn)共有4個原生種，分別為光葉三角梅、紅花三角、秘魯三角梅和密節(jié)三角梅。
綜上所述，近年來我國學者對三角梅的研究多側重于組織培養(yǎng)、快速繁殖和栽培技術方面，而對三角梅的品種分類及其遺傳多樣性卻鮮有報道。

3、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：
本實驗采用三角梅48個品種為研究對象，來探討三角梅屬植物的遺傳多樣性。目的在于通過對48個品種的三角梅的RAPD分析，探索不同品種三角梅間的遺傳多樣性，為三角梅屬植物的分類和品種鑒定提供參考依據(jù)，同時也為三角梅屬植物的引種及新品種選育提供理論依據(jù)和應用基礎。主要內(nèi)容如下：
（1）建立三角梅屬48個品種的RAPD分析體系，對48個品種的三角梅的核DNA遺傳多態(tài)性、聚類樹進行分析；
（2）在分子標記的基礎上，根據(jù)所得到的分子數(shù)據(jù)，并結合相關資料對三角梅的遺傳多樣性進行綜合分析。
成果形式：畢業(yè)論文

4、擬解決的關鍵問題：
（1）優(yōu)化CTAB法提取三角梅48個品的DNA。
（2）建立RAPD反應體系
（3）優(yōu)化RAPD-PCR反應體系
（4）優(yōu)化瓊脂凝膠電泳系統(tǒng)
5、研究思路、方法和步驟：
思路：
參考他人文獻，根據(jù)查閱的資料設計適合三角梅的RAPD反應體系，接著進行預實驗，檢測實驗的合理性，并進行適當調(diào)整，緊接著進行實驗，并做實驗補充，然后處理數(shù)據(jù)。
方法：
本實驗采用隨機擴增多態(tài)性 (RAPD)技術對三角梅遺傳多樣性進行研究，RAPD分子標記建立在PCR基礎之上。通過使用一系列具有10個堿基的單鏈隨機引物，對基因組的全部NDA進行PCR擴增，然后經(jīng)瓊脂凝膠電泳分離，通過EB染色就可檢測被擴增的DNA的多態(tài)性。為了使實驗結果更準備，本實驗采用單因素實驗和正交實驗相結合，對影響PCR擴增效果的一些因素進行篩選和優(yōu)化。

步驟:
三角梅屬48個品種的嫩葉采集 → 核基因組的DNA的提取（CTAB法） → 基因組DNA組質量檢測 → 引物的篩選 → RAPD擴增反應 → PCR產(chǎn)物的檢測 → 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析 → RAPD分析三角梅的遺傳多樣性

6、本課題的進度安排：
2011.09 查閱文獻，確定方法并進行預實驗以確定實驗反應體系。
提取三角梅屬植物的DNA
2011.10利用單因素和正交實驗進一步優(yōu)化實驗體系。
引物的初步篩選
2011.11 對篩選后的引物進行RAPD-PCR擴增及產(chǎn)物檢測。
2012.01 對實驗效果較不佳的引物重新進行RAPD-PCR擴增及產(chǎn)物檢測。
2012.02 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
2012.03-2012.05 寫畢業(yè)論文和準備答辯材料

7、參考文獻：
[1]劉曉宇.RAPD分子標記技術概述及應 ……（未完，全文共4000字，當前僅顯示2020字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題報告：基于RAPD的三角梅屬種質資源遺傳多樣性研究》）