論文開題報(bào)告：橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開題報(bào)告
學(xué)院：　化工學(xué)院　　　　　　　專業(yè)班級：　2009級生物技術(shù)一班
課題名稱 橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測

1、本課題的的研究目的和意義：
從橄欖葉中提取多酚類生物活性物質(zhì)一直是研究重點(diǎn)。本課題的研究重點(diǎn)是從橄欖葉中分離提取到橄欖苦甙化合物。橄欖苦苷具有抗氧化、抗真菌、抗炎、抗病毒、預(yù)防冠心病、動脈粥樣硬化、舒緩血管平滑肌、抗氧化、抗癌和降血糖等多種藥理作用。目前的分離技術(shù)主要有超臨界萃取法，索氏提取法和微波提取法。我們的想法則是運(yùn)用廉價的離子樹脂法來分離得到天然產(chǎn)物橄欖苦苷以及檢測相關(guān)產(chǎn)物活性。

2、 文獻(xiàn)綜述（國內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：
國外關(guān)于油橄欖的研究已從有效成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定轉(zhuǎn)化為對其生物活性及其中有效成分含量變化規(guī)律的研究。國內(nèi)研究僅限予用油橄欖果榨取橄欖油，油橄欖的其
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)3一NaOH體系顯色后于510nm處可測得油橄欖葉總黃酮和橄欖苦苷的吸光度之和；而以AlCl3體系顯色后于415nm處僅測得總黃酮的吸光度，橄欖苦苷無吸收。利片橄欖苦苷在兩種顯色體系中的吸收特性差別，通過差減法換算后可間接測定樣品中橄欖苦苷的含量。以UV—Vis差減法測得油橄欖葉及其純化浸膏中橄欖苦苷的平均含量分別為11.6％和63.4％，3次測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.5％和1.2％，其結(jié)果與高效液相色譜法(HPLC)測定結(jié)果的相對誤差小于4％。該方法可替代HPLC用于油橄欖葉中橄欖苦苷的含量測定，為油橄欖葉及其制品的質(zhì)量控制提供了一種快速、簡便、成本低廉的分析方法。


3、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：
本課題從分離測定方面入手，主要研究使用何種廉價的大孔樹脂來吸附純化橄欖苦苷的初提物，繼而研究吸附純化當(dāng)中的各種影響要素，如吸附時間，解吸液的濃度，上樣量的質(zhì)量濃度以及洗脫劑用量等對純化效果的影響。選其最優(yōu)要素對初提物的純化，再用事先研究的光度法測定其橄欖苦苷的含量。通過大孔純化的初提物中的橄欖苦苷的含量明顯提高，繼而用葡聚糖凝膠進(jìn)一步的純化，使橄欖苦苷的純度再一次的提升，等于說其活性進(jìn)一步得到了提升，再用光度法測其橄欖苦苷的含量。


成果形式以最后得到的產(chǎn)物、硅膠薄層點(diǎn)板的樣板、畢業(yè)論文的形式呈現(xiàn)。



4、擬解決的關(guān)鍵問題：
如何再現(xiàn)應(yīng)用光度法測定橄欖苦苷的含量
如何用硅膠薄層點(diǎn)板判斷梯度洗脫的終點(diǎn)



5、研究思路、方法和步驟：
本課題從橄欖苦苷等多酚類物質(zhì)的理化性質(zhì)，分子量大小和極性等方面著手從橄欖葉中來分離純化橄欖苦苷，其間最重要的一環(huán)則是用簡易的光度法測量橄欖苦苷的純度來代替繁瑣的高效液相色譜檢測方法。

具體方法：
①首先利用橄欖苦苷的溶解性質(zhì)（易溶于甲醇）對橄欖苦苷進(jìn)行初步提取，將樹葉浸泡于甲醇中10天左右，反復(fù)浸泡樹葉約2到3次，周期為10天左右。
②將上述初提物取部分用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將初提物蒸干，測其質(zhì)量。再用蒸餾水溶解，取適當(dāng)溶解液在大孔樹脂中上樣，待其完全吸附約5h，再用不同梯度的甲醇（0%，10%，20%，40%，60%，100%）進(jìn)行洗脫，洗脫劑量按硅膠點(diǎn)板定量。洗脫時須用不同錐形瓶收取洗脫液。
③用硅膠薄層點(diǎn)板進(jìn)行點(diǎn)樣，樣品為錐形瓶內(nèi)洗脫液，用此方法合并相同梯度內(nèi)的不同錐形瓶內(nèi)的洗脫液。用光度法進(jìn)行檢測含量，確定含量最高的那個錐形瓶。
④將含量最高的錐形瓶內(nèi)的洗脫液蒸干稱重，加蒸餾水溶解，用葡聚糖凝膠柱層析進(jìn)行再次純化，用上述相同方法進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，再次點(diǎn)板，用光度法進(jìn)行檢測，確定最終純化的效果。
⑤后續(xù)工作為用高效液相色譜再次檢測，還有就是進(jìn)行一些測定活性方面的工作。





6、本課題的進(jìn)度安排：
2012.11-2012.12 采集5kg的橄欖樹葉作為原料并將原料磨碎浸泡于工業(yè)甲醇中，浸泡時間半個月。
2012.12-2013.1 將小部分初提物于葡聚糖凝膠進(jìn)行過柱分離并用梯度洗脫方法進(jìn)行洗脫。
2013.3-20 ……（未完，全文共3337字，當(dāng)前僅顯示1686字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題報(bào)告：橄欖葉中生物活性天然產(chǎn)物的分離與檢測》）