畢業(yè)論文：產(chǎn)蛋白酶菌株VV6及XH7的分類鑒定

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開題報(bào)告
學(xué)院：化工學(xué)院　　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：　　生物工程專業(yè)　
課題名稱 產(chǎn)蛋白酶菌株VV6及*H7的分類鑒定

1、本課題的的研究目的和意義：

細(xì)菌分類學(xué)是研究細(xì)菌分類理論和方法的科學(xué)，它包括（分類、命名、和鑒定)3個(gè)獨(dú)立和相關(guān)的分類學(xué)領(lǐng)域。細(xì)菌鑒定的應(yīng)用：動(dòng)、植物檢疫、食品衛(wèi)生檢驗(yàn)、人類及動(dòng)、植物病原診斷、環(huán)境微生物學(xué)研究。主要任務(wù)是在全面了解細(xì)菌的生物學(xué)特征的基礎(chǔ)上，研究它們的種類，探索其起源、演化以及與其他類群之間的親緣關(guān)系，進(jìn)而提出能反映自然發(fā)展的分類系統(tǒng)，并將微生物加以分門別類。所謂分類，就是在對大量細(xì)菌進(jìn)行逐一的觀察、分析和描述的基礎(chǔ)上，按照它們個(gè)體發(fā)育的形態(tài)、培養(yǎng)特征、生理生化特征、細(xì)胞化學(xué)組分以及分子生物學(xué)特征等一系列性狀的異同和主次，并根據(jù)它們的親緣關(guān)系和應(yīng)用的方便，加以分門別類（歸納為綱、目、科、屬、種），從而制定為鑒定用的檢索表，用
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和微機(jī)系統(tǒng)，廣泛的鑒定功能，適用于臨床微生物實(shí)驗(yàn)室。衛(wèi)生防疫和商標(biāo)標(biāo)系統(tǒng)，主要功能包括細(xì)菌鑒定、細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)及最低抑菌濃度（MIC）的測定等。其準(zhǔn)確性和可靠性均已大大提高。
1675年，荷蘭商人Leeuwenhock自制了第一架顯微鏡
1753年瑞典博物學(xué)家林奈（Carolus Linnaeus）在《植物種志》一書中提出二界系統(tǒng)[2]。
1838年，德國生物學(xué)家Ehnenberg把細(xì)菌列為纖毛蟲綱，分為2個(gè)科，即單胞菌科和弧菌科，弧菌科再劃分5個(gè)屬。1857年德國植物學(xué)家Negeli將其獨(dú)立設(shè)一綱，取名為裂殖綱。
1872年，德國植物學(xué)家Cohn發(fā)表了一個(gè)新的細(xì)菌分類系統(tǒng)，根據(jù)形態(tài)特征把細(xì)菌分成4個(gè)族，每個(gè)族由1至多個(gè)屬組成。
1854年，Koch發(fā)明了固體培養(yǎng)基，從而有可能獲得純培養(yǎng)物來進(jìn)行研究。
1909年，Jensen發(fā)表了一種分類法，采用形態(tài)和病原性特征，還依據(jù)細(xì)菌代謝活性，突破了純形態(tài)的分類局限，在細(xì)菌分類學(xué)上向前邁出了重要一步。
1917年，美國細(xì)菌學(xué)家協(xié)會(huì)指導(dǎo)和撰寫了細(xì)菌分類學(xué)著作《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》（Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology）至今仍是國際上從事研究細(xì)菌學(xué)工作者必備的工具書。
20世紀(jì)40至50年代這一時(shí)期在試驗(yàn)手段上只是從數(shù)量上增加生理學(xué)、生物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)及營養(yǎng)要求等。所以，這一時(shí)期的細(xì)菌分類只是量上的變化，沒有質(zhì)的飛躍。在這時(shí)期中，科學(xué)家們也曾試圖建立新的分類系統(tǒng)，但由于實(shí)驗(yàn)手段的限制，未能實(shí)現(xiàn)[1]。
在這同一時(shí)期中，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的建立和日臻完善，20世紀(jì)60年代末Carl Woese和George Fo*根據(jù)所有細(xì)胞生物中均含有rRNA分子，其大小適中（約1540bp）、堿基組成保守、一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)高度保守、功能保守等特征，確認(rèn)16S rRNA的變異不受環(huán)境影響，只是時(shí)間的函數(shù)，是度量生物進(jìn)化、進(jìn)化譜系分析極佳的“分子尺”。在進(jìn)行了原核生物16S rRNA、真核生物18S rRNA的寡核苷酸編目檢測后，比較各類生物的rRNA特征序列，從序列差異計(jì)算出不同生物間的進(jìn)化距離，繪制出系統(tǒng)發(fā)育樹（phylogenetic tree）（圖1-1）[2]。




























2、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：

主要內(nèi)容：本課題主要對分離自北極的蛋白酶產(chǎn)生菌株VV6和VV7進(jìn)行分類鑒定，探索其系統(tǒng)進(jìn)化地位。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括細(xì)菌形態(tài)特征觀察、生理生化特征實(shí)驗(yàn)、DNA中G+C mol%測定、以及16S rRNA 基因序列分析。






成果形式：以數(shù)學(xué)模型和論文的形式提交成果。


4、擬解決的關(guān)鍵問題：

擬解決的關(guān)鍵問題：對優(yōu)化過程中若干參數(shù)的相互影響與干擾進(jìn)行細(xì)致調(diào)節(jié)，努力獲得全局化考量。





5、研究思路、方法和步驟：

研究思路、方法和步驟：
1、細(xì)菌總DNA的提取
2、瓊脂糖凝膠電泳
3、感受態(tài)細(xì)胞的制備
4、感受態(tài)細(xì)胞效價(jià)
5、16S rRNA基因PCP擴(kuò)增
6、PCR 產(chǎn)物純化
7、16S rRNA基因核酸內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
8、聚丙烯酰胺凝膠電泳
9、RFLP圖譜分析
10、連接反 ……（未完，全文共5210字，當(dāng)前僅顯示1829字，請閱讀下面提示信息。收藏《畢業(yè)論文：產(chǎn)蛋白酶菌株VV6及*H7的分類鑒定》）