畢業(yè)論文：橄欖葉等植物來(lái)源黃嘌呤氧化酶抑制劑活性研究

題目：橄欖葉等植物來(lái)源黃嘌呤氧化酶抑制劑活性研究
院（系） 化工學(xué)院
專(zhuān) 業(yè) 生物工程

橄欖葉等植物來(lái)源黃嘌呤氧化酶抑制劑活性研究
摘要
摘要：【目的】檢測(cè)篩選橄欖葉等植物來(lái)源的活性成分對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用�！痉椒ā坎捎妹阜磻�(yīng)速率法測(cè)定樣品對(duì)酶活性的抑制能力大小�！窘Y(jié)果】在橄欖葉粗提物及其過(guò)色譜柱層析分離后的組分中，發(fā)現(xiàn)脂溶性粗提物總體上比水溶性粗提物效果好。11月份的抑制活性最高，其半數(shù)抑制濃度為253.25μg/mL，而當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)過(guò)柱分離純化后，其中的小分子組分半數(shù)抑制濃度僅為72.34μg/mL，抑制活性增加了3.5倍。在9種中草藥粗提物中，發(fā)現(xiàn)水溶性粗提物抑制效果總體優(yōu)于脂溶性粗提物。其中葛花，貓須草，金銀花三種藥材的粗提物抑制效果最好，葛花的半數(shù)抑制濃度為647.17mg/mL，在三種水溶性粗提物中抑制效果最佳。對(duì)橄欖葉11月甲醇粗提物，過(guò)柱分離后的粗提物，葛花、貓須草水溶性粗提物做抑制類(lèi)型檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有樣品均為以競(jìng)爭(zhēng)性抑制為主的復(fù)合抑制類(lèi)型�！窘Y(jié)論】從橄欖葉等植物來(lái)源的成分對(duì)黃嘌呤氧化酶都有較好的抑制效果，尤其橄欖葉的抑制效果明顯優(yōu)于另外9種中藥，這為研究開(kāi)發(fā)新的抗痛風(fēng)藥物開(kāi)拓了新的視野和方向，為進(jìn)一步分離純化藥效物質(zhì)提供了參考。
關(guān)鍵詞：橄欖葉；中草藥；黃嘌呤氧化酶抑制劑；半數(shù)抑制濃度；抑制類(lèi)型。


The research of inhibitory ability of *anthine o*idase inhibitors from olive leaves and other plant sources
Abstract
Abstract:[Objective] Detect and screen active ingredients of *anthine o*ida
……（新文秘網(wǎng)http://120pk.cn省略1265字，正式會(huì)員可完整閱讀）……　
ected in November, small molecular components , flos puerariae and clerodendranthus spicatus water-soluble e*tracts , a mi*ed mode of inhibition was found, which give priority to competitive mode of inhibition. [Conclusion]All the e*tracts had inhibitory abilities, especially the ones from olive leaves ,which the effect of inhibition is obviously superior than any other Chinese herbal medicine e*tracts . The result opened up a new horizon and direction in the research and development for new drug of gout .
Key words: olive leaves; Chinese herbal medicine; *anthine o*idase inhibitors; inhibition concentration 50; inhibition mode.

摘要 I
Abstract II
第1章 緒論 2
1.1 概述 2
1.1.1黃嘌呤氧化酶概述 2
1.1.2黃嘌呤氧化酶抑制劑概述 2
1.1.3 橄欖葉研究現(xiàn)況 2
1.1.4 從中草藥中提取黃嘌呤氧化酶抑制劑的研究現(xiàn)況 2
1.2 實(shí)驗(yàn)原理 2
1.2.1黃嘌呤氧化酶酶活力測(cè)定原理 2
1.2.2抑制類(lèi)型判斷原理 2
1.3 研究目的和意義 2
第2章 材料與方法 2
2.1試劑與儀器 2
2.1.1試劑與藥品 2
2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器 2
2.2實(shí)驗(yàn)材料 2
2.2.1.橄欖葉不同組分粗提物 2
2.2.2 中草藥不同組分粗提物 2
2.2.3 中草藥不同組分活性粗提物的提取 2
2.3 實(shí)驗(yàn)方法 2
2.3.1溶液配置 2
2.3.2檢測(cè)方法 2
第3章 結(jié)果與討論 2
3.1樣品粗提物抑制率檢測(cè)篩選方法的建立與優(yōu)化 2
3.1.1反應(yīng)體系體積比的優(yōu)化 2
3.1.2反應(yīng)體系底物濃度優(yōu)化 2
3.1.3 反應(yīng)操作條件優(yōu)化 2
3.1.4 黃嘌呤氧化酶濃度優(yōu)化 2
3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2
3.2.1橄欖葉活性組分粗提物初篩結(jié)果 2
3.2.2中草藥活性組分粗提物初篩結(jié)果 2
3.3.3 橄欖葉活性組分粗提物半數(shù)抑制濃度 的計(jì)算 2
3.3.4 中草藥水溶活性組分粗提物半數(shù)抑制濃度 計(jì)算 2
3.3.5樣品抑制類(lèi)型判定 2
3.3結(jié)果分析及討論 2
3.3.1 橄欖葉粗提物結(jié)果討論 2
3.3.2 中草藥粗提物結(jié)果討論 2
3.3.3 抑制類(lèi)型結(jié)果討論 2
第4章 結(jié)論和展望 2
4.1 結(jié)論 2
4.2 展望 2
參考文獻(xiàn) 2
致謝 2













第1章 緒論
1.1 概述
1.1.1黃嘌呤氧化酶概述
黃嘌呤氧化酶( *anthine O*idase , *OD)， EC1．2．3．2，是一種黃素蛋白酶, 專(zhuān)一性不高，既能催化次黃嘌呤生成黃嘌呤，進(jìn)而生成尿酸，又能直接催化黃嘌呤生成尿酸的酶，同時(shí)產(chǎn)生過(guò)氧化物_基，是體內(nèi)核酸代謝中重要的酶，黃嘌呤氧化酶催化反應(yīng)如下：
次黃嘌呤 + O+ → 黃嘌呤 +
黃嘌呤 + O + → 尿酸 +
黃嘌呤 + O + 2 → 尿酸 + 2 + 2
它存在于牛乳、動(dòng)物特別是鳥(niǎo)類(lèi)的肝臟與腎臟、昆蟲(chóng)、細(xì)菌中。分子量10幾萬(wàn)―30幾萬(wàn)。其底物專(zhuān)性較廣，除以嘌呤衍生物為電子供體外，還可以蝶啶衍生物、醛（生成羧酸）為電子供體，表面上生成羥基化合物，氧原子來(lái)源于水。NADH也氧化。電子受體很多，有分子氧、硝酸鹽、苯醌、硝基化合物、NAD 、鐵氧還蛋白等，但依酶的來(lái)源而有所不同。在反應(yīng)時(shí)生成過(guò)氧化物，引起連鎖反應(yīng)。黃嘌呤氧化酶的晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)被解析[1],它由1 330個(gè)氨基酸構(gòu)成,由兩個(gè)完全對(duì)稱(chēng)的結(jié)構(gòu)單元構(gòu)成。每一個(gè)結(jié)構(gòu)單元為145 ku ,其催化中心包括一個(gè)鉬蝶呤(Molybdopterin , Mo2pt) 中心、兩個(gè)鐵2硫中心(Iron2suL Furcenters , Fe/ S Ⅰ,Ⅱ) 和一個(gè)黃素腺嘌呤二核苷酸(FLavin Adenine DinucLeotide , FAD) ,其中鉬蝶呤中心是黃嘌呤氧化酶催化黃嘌呤生成尿酸的關(guān)鍵位點(diǎn)。尿酸濃度過(guò)高將導(dǎo)致高尿酸血癥, 可引起痛風(fēng)發(fā)作，_基涉及到炎癥等一系列病理過(guò)程。抑制黃嘌呤氧化酶的活性, 既可以減少體內(nèi)尿酸的形成, 有效地阻止或延緩?fù)达L(fēng)及其并發(fā)癥, 又可以減少_基造成的組織傷害。
1.1.2黃嘌呤氧化酶抑制劑概述
黃嘌呤氧化酶抑制劑作為抗痛風(fēng)藥物,從上世紀(jì)60 年代上市的別嘌呤醇,到后來(lái)的丙磺舒、苯溴馬隆，以及秋水仙堿，都有很好的治療作用。 其中別嘌呤醇通過(guò)抑制黃嘌呤氧化酶的活性,減少黃嘌呤向尿酸的轉(zhuǎn)化,從根本上減少體內(nèi)尿酸的生成,從而達(dá)到治療痛風(fēng)的作用,自1963年用于臨床以來(lái),一直是一線(xiàn)抗痛風(fēng)藥。然而,應(yīng)用后病人可能有發(fā)熱、過(guò)敏性皮疹、腹痛、腹瀉、白細(xì)胞及血小板減少等癥狀,甚至有肝功能損害等副作用。因此,研究新的黃嘌呤氧化酶抑制劑具有十分重要的意義。一些天然植物及中草藥中富含豐富的黃酮類(lèi)化合物及其他活性成分, 具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗癌、抗心腦血管疾病等多種藥理作用，且根據(jù)已有的研究結(jié)果，這些活性成分對(duì)于黃嘌呤氧化酶具有很好的的抑制效果,使得植物和中草藥來(lái)源的活性成分在研發(fā)黃嘌呤氧化酶抑制劑新藥中頗具前景。[2]
1.1.3 橄欖葉研究現(xiàn)況
近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)橄欖的研究主要集中在木犀科(OLeaceae)木犀欖屬(OLea L．)的歐橄欖(木犀欖)OLeaeuropaea L．[3] 。長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直從橄欖油中提取有效活性成份，發(fā)現(xiàn)從橄欖油中得到的活性組分能夠有效抑制黃嘌呤氧化酶的活性[4]，然而，生物學(xué)家發(fā)現(xiàn)，橄欖葉含有的抗氧化活性成份較之橄欖油更為突出(高100倍)，尤其是橄欖苦苷(oLeuropein)和黃酮類(lèi)化合物在葉中的含量明顯高于果實(shí)和 ……（未完，全文共19757字，當(dāng)前僅顯示3554字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《畢業(yè)論文：橄欖葉等植物來(lái)源黃嘌呤氧化酶抑制劑活性研究》）